蟾酥及其制劑的含量測定方法很多,如分光光度法、薄層掃描法、差示光度法、高效液相色譜法和氣相色譜法等。
分光光度法
稱取蟾酥適量,置索氏提取器中,加氯仿回流提取 5 小時,揮干氯仿。殘渣分為二份,一份以乙醇溶解定容;另一份加 4% NaOH 溶液 2mL,并用乙醇稀釋至刻度,搖勻,室溫下放置 30 分鐘后于 360nm 分別測定兩份溶液的吸收度,計算△ A,由回歸方程計算含量。
取蟾酥約 0.5g,于 80℃干燥 2 小時,研成細(xì)粉,精密稱定,加海砂 5g,混勻,置索氏提取器中,加氯仿適量,提取4 小時,回收氯仿,殘留物加乙醇適量使溶解,濾過,濾液移至 100mL 量瓶中,用少量乙醇分?jǐn)?shù)次洗滌濾器,洗滌液并入量瓶中并加乙醇稀釋至刻度,搖勻,精密量取 lmL置 25mL 量瓶中,加乙醇稀釋至刻度,搖勻,在 299nm 波長處測定吸收度,按脂蟾毒配基 (C24H3204) 的吸收系數(shù) E ;蘭為 154 計算,即得。
薄層掃描法
薄層掃描法應(yīng)用較廣,常用硅膠 G 板,丙酮 - 氯仿 -環(huán)己烷展開系統(tǒng),在 λS300nm,λR340nm 處進(jìn)行反射式鋸齒掃描。可測定脂蟾毒配基、華蟾毒精、蟾毒靈、蟾毒它靈、遠(yuǎn)華蟾毒精及日蟾毒它靈等多種成分。
氣相色譜法
用氣相色譜法測定蟾酥及其制劑的樣品需進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理,如將樣品提取液先經(jīng)過柱層析或薄層層析后,方可進(jìn)行氣相色譜測定,采用 FID 檢測器,內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法定量。
高效液相色譜法
蟾酥中含有的蟾蜍笛二烯類、強心甾烯蟾毒類和吲哚堿類成分,都具有紫外吸收,可用高效液相色譜法測定。如《中
國藥典》2005 年版蟾酥中華蟾酥毒基和脂蟾毒配基就是用高效液相色譜法測定。